ⅠNkwas ukleinowyiwprowadzenie
Kwas nukleinowy dzieli się na kwas dezoksyrybonukleinowy (DNA) i kwas rybonukleinowy (RNA), wśród których RNA dzieli się na rybosomalny RNA (rRNA), informacyjny RNA (mRNA) i transferowy RNA (tRNA) zgodnie z jego różnymi funkcjami.DNA koncentruje się głównie w jądrze, mitochondriach i chloroformie, podczas gdy RNA jest rozmieszczony głównie w cytoplazmie.Ekstrakcja kwasów nukleinowych, będąca materialną podstawą ekspresji genów, odgrywa niezwykle ważną rolę w badaniach z zakresu biologii molekularnej i klinicznej diagnostyce molekularnej.Stężenie i czystość ekstrakcji kwasu nukleinowego będzie miało bezpośredni wpływ na późniejszą reakcję PCR, sekwencjonowanie, konstrukcję wektora, trawienie enzymatyczne i inne eksperymenty.
Ⅱ Metoda ekstrakcji i oczyszczania kwasów nukleinowych
① Metoda ekstrakcji fenolem/chloroformem
Ekstrakcja fenolem/chloroformem to klasyczna metoda ekstrakcji DNA, która wykorzystuje głównie dwa różne rozpuszczalniki organiczne do obróbki próbek, rozpuszczając kwas nukleinowy na bazie DNA w fazie wodnej, lipidy w fazie organicznej i białka pomiędzy dwiema fazami.Zaletą tej metody jest niski koszt, wysoka czystość i dobry efekt.Wadami są skomplikowana obsługa i długi czas.
② Metoda trizolowa
Metoda Trizolowa jest klasyczną metodą ekstrakcji RNA.Metodę Trizol dzieli się na fazę wodną i fazę organiczną po odwirowaniu z chloroformem, w którym RNA rozpuszcza się w fazie wodnej, fazę wodną przenosi się do nowej probówki EP, wytrącanie uzyskuje się po dodaniu izopropanolu, a następnie oczyszczanie etanolem.Metoda ta nadaje się do ekstrakcji RNA z tkanek, komórek i bakterii zwierząt.
③ Metoda oczyszczania na kolumnie odśrodkowej
Metoda oczyszczania na kolumnie wirówkowej może adsorbować DNA specyficznie przez specjalne materiały adsorpcyjne z matrycą krzemową, podczas gdy RNA i białko mogą przechodzić płynnie, a następnie użyć wysokiej zawartości soli i niskiego PH do połączenia kwasu nukleinowego, elucji o niskiej zawartości soli i wysokiej wartości PH w celu oddzielenia i oczyszczenia kwasu nukleinowego.Zaletami są wysokie stężenie oczyszczania, wysoka stabilność, brak konieczności stosowania rozpuszczalnika organicznego i niski koszt.Wadą jest to, że należy go wirować krok po kroku, wykonując więcej etapów operacji.
④ Metoda koralików magnetycznych
Metoda kulek magnetycznych polega na rozdzieleniu próbki tkanki komórkowej przez lizat, uwolnieniu kwasu nukleinowego w próbce, a następnie cząsteczki kwasu nukleinowego są specyficznie adsorbowane na powierzchni kulki magnetycznej, natomiast zanieczyszczenia takie jak białka i cukry pozostają w próbce płyn.Poprzez etapy podziału tkanki komórkowej, wiązania kulek magnetycznych z kwasem nukleinowym, przemywania kwasu nukleinowego, elucji kwasu nukleinowego itp., ostatecznie otrzymuje się czysty kwas nukleinowy.Zaletami są prosta obsługa i krótki czas użytkowania, bez konieczności stopniowego wirowania.Ma niskie wymagania techniczne i może realizować pracę automatyczną i masową.Specyficzna kombinacja kulki magnetycznej i kwasu nukleinowego sprawia, że ekstrahowany kwas nukleinowy ma wysokie stężenie i czystość.Wadą jest to, że obecna cena rynkowa jest stosunkowo wysoka.
⑤ Inne metody
Oprócz powyższych czterech metod istnieją kraking wrzący, metoda stężonej soli, metoda detergentu anionowego, metoda ultradźwiękowa i metoda enzymatyczna itp.
Ⅲ Rodzaj ekstrakcji kwasu nukleinowego
Foregene posiada wiodącą na świecie platformę Direct PCR, dwukolumnową platformę izolacji RNA (tylko DNA + tylko RNA).Do głównych produktów należą zestawy do izolacji DNA/RNA, seria odczynników do laboratoriów molekularnych do PCR i Direct PCR.
① Ekstrakcja całkowitego RNA
Próbki do ekstrakcji całkowitego RNA obejmują krew, komórki, tkanki zwierzęce, rośliny, wirusy itp. Wysoką czystość i wysokie stężenie całkowitego RNA można uzyskać poprzez ekstrakcję całkowitego RNA, którą można zastosować w RT-PCR, analizie chipów, translacji in vitro, klonowanie molekularne, Dot Blot i inne eksperymenty.
Związane z ForegeneZestawy do izolacji RNA
Zestaw do izolacji całkowitego RNA zwierzęcia--Szybko i skutecznie ekstrahuj wysokiej czystości i wysokiej jakości całkowite RNA z różnych tkanek zwierzęcych.
Zestaw do izolacji całkowitego RNA komórkowego--Wysoko oczyszczony i wysokiej jakości całkowity RNA można uzyskać z różnych hodowanych komórek w ciągu 11 minut.
Zestaw do izolacji całkowitego RNA roślinnego--Szybko ekstrahuj wysokiej jakości całkowity RNA z próbek roślin o niskiej zawartości polisacharydów i polifenoli.
Zestaw do izolacji wirusowego RNA--Szybko izoluj i oczyszczaj wirusowe RNA z próbek takich jak osocze, surowica, płyny ustrojowe bezkomórkowe i supernatanty hodowli komórkowych.
② Ekstrakcja genomowego DNA
Próbki do ekstrakcji genomowego DNA obejmują glebę, kał, krew, komórki, tkanki zwierzęce, rośliny, wirusy itp. Ekstrakcja genomowego DNA może być stosowana w trawieniu enzymatycznym, konstruowaniu biblioteki DNA, PCR, przygotowywaniu przeciwciał, analizie hybrydyzacji Western blot, chipie genowym, wysokiej -sekwencjonowanie przepustowości i inne eksperymenty.
Związane z ForegeneZestawy do izolacji DNA
Zestaw do izolacji DNA tkanek zwierzęcych--Szybka ekstrakcja i oczyszczanie genomowego DNA z wielu źródeł, takich jak tkanki zwierzęce, komórki itp.
Zestaw Midi DNA krwi (1-5ml)--Szybko oczyszczaj wysokiej jakości genomowy DNA z antykoagulowanej krwi (1-5 ml).
Zestaw do izolacji DNA z wymazu z policzka/karty FTA--Szybko oczyszczaj wysokiej jakości genomowe DNA z próbek wymazu z policzka/karty FTA.
Zestaw do izolacji DNA roślin--Szybko oczyszczaj i uzyskuj wysokiej jakości genomowe DNA z próbek roślin (w tym próbek roślin polisacharydów i polifenoli)
③ Ekstrakcja plazmidu
Plazmid to rodzaj kolistego, drobnocząsteczkowego DNA w komórkach, który jest powszechnym nośnikiem rekombinacji DNA.Metoda ekstrakcji plazmidu polega na usunięciu RNA, oddzieleniu plazmidu od genomowego DNA bakterii oraz usunięciu białka i innych zanieczyszczeń w celu uzyskania stosunkowo czystego plazmidu.
Ogólny minizestaw plazmidowy--Szybko oczyszczaj wysokiej jakości plazmidowy DNA z transformowanych bakterii do rutynowych eksperymentów z zakresu biologii molekularnej, takich jak transformacja i trawienie enzymatyczne
④ Inne typy ekstrakcji, ekstrakcja miRNA itp.
Zestaw do izolacji miRNA zwierząt--Szybko i skutecznie ekstrahuj małe fragmenty RNA o wielkości 20–200 nt miRNA, siRNA, snRNA z różnych tkanek i komórek zwierzęcych
Ⅳ Wymagania dotyczące wyniku ekstrakcji i oczyszczania kwasów nukleinowychs
① Aby zapewnić integralność pierwszorzędowej struktury kwasu nukleinowego.
② Zmniejsz interferencję białek, cukrów, lipidów i innych makrocząsteczek
③ W próbkach kwasów nukleinowych nie powinno być żadnego rozpuszczalnika organicznego ani wysokiego stężenia jonów metali, które mogłyby hamować enzym.
④ Podczas ekstrakcji DNA należy wyeliminować RNA i inne zanieczyszczenia kwasami nukleinowymi i odwrotnie.
Czas publikacji: 24 listopada 2022 r
